SmartBlock™

Anwendung

Produktbeschreibung

Zusammensetzung: basierend auf chemisch modifizierten Peptiden, frei von Serumproteinen wie BSA
pH-Wert: pH 7,0
Stabilisator: enthält 0.1% ProClin® 300
Lagerung: Bei –20 °C oder bei 2 – 8 °C
Haltbarkeit: bei –20 °C: 1 Jahr, einmaliges Einfrieren und Auftauen ist möglich bei 2 – 8 °C: 6 Monate

Nur für in-vitro Forschung

Lieferbare Packungsgrößen:

125 ml Bestellnummer: 113 125
500 ml Bestellnummer: 113 500

SmartBlock™ verhindert in vielen Assays unspezifische und unerwünschte Bindungen an die Oberfläche. Durch Inkubation der Oberfläche (z.B. Mikrotiterplatte oder Western Blot Membran) werden freie Bindungsstellen der Oberfläche durch die Bestandteile von SmartBlock™ abgesättigt, so dass bei den nachfolgenden Arbeitsschritten die unerwünschte Anbindung des Zielanalyten bzw. des Detektorantikörpers an die Oberfläche minimiert wird. Hierdurch wird der Hintergrund reduziert. Durch die BSA-Freiheit sind übliche Probleme wie BSA-Interaktionen und Kreuzreaktivitäten mit Serum-Proteinen des Blockierers bei SmartBlock™ von vorne herein ausgeschlossen.
Die Einsatzgebiete sind neben dem ELISA, EIA oder Western Blot auch Immuno-PCR und Protein Arrays, bei denen Protein-adsorbierende Oberflächen geblockt werden müssen.
Die Eignung für den jeweiligen Assay und die jeweiligen Antikörper ist vom Anwender zu testen.

Der Puffer sollte nach dem Auftauen und unmittelbar vor Gebrauch nochmals durch Schwenken gründlich durchmischt werden. Der Puffer ist gebrauchsfertig. Mehrfaches Einfrieren und Auftauen ist möglich.

Anwendung

Absättigen / Blockieren von Mikrotiterplatten

1. Falls die Mikrotiterplatte zuvor mit detergenshaltigen Reagenzien benetzt wurde, muss die Platte 3 x mit einem detergensfreien Waschpuffer (z.B. Washing Buffer TRIS ohne Tween, Best.-Nr. 146 500 oder Washing Buffer PBS ohne Tween, Best.-Nr. 141 500) gewaschen werden. Falls nur Coating Buffer (Best.-Nr. 120 125 oder 121 125) verwendet wurde, muss die Coatinglösung lediglich abgesaugt oder ausgeklopft werden.

2. Zugabe von 200-300µl SmartBlock™ pro Well. Inkubation bei Raumtemperatur für 1-4 Stunden oder über Nacht (1 Stunde genügt häufig). Anmerkung: Durch Schütteln der Platte mit 600-900 rpm kann die Blockierungszeit je nach Anwendung weiter verringert werden. Die Blockierungszeit ist abhängig von den Eigenschaften der zu blockierenden Oberfläche und sollte daher ausgetestet werden.

3. Absaugen oder Ausklopfen des SmartBlock™ ; 3 x Waschen der Mikrotiterplatten mit einem Waschpuffer, der ein nicht ionisches Detergens enthält, z.B. Washing Buffer TRIS, Best.-Nr. 145 500 oder Washing Buffer PBS, Best.-Nr. 140 500.

Absättigen / Blockieren von Blotting-Membranen

1. Falls die Blotting Membran zuvor mit detergenshaltigen Reagenzien benetzt wurde, muss die Membran 3 x mit einem detergensfreien Waschpuffer (z.B. Washing Buffer TRIS ohne Tween, Best.-Nr. 146 500 oder Washing Buffer PBS ohne Tween, Best.-Nr. 141 500) gewaschen werden.

2. Eintauchen der Blotting Membran in SmartBlock™ . Inkubation bei Raumtemperatur und unter leichtem Schütteln für 1- 4 Stunden oder über Nacht (1 Stunde genügt häufig). Die Blockierungszeit ist abhängig von den Eigenschaften der zu blockierenden Membran und sollte daher ausgetestet werden.

3. a) Dreimaliges Waschen der Blotting Membran mit einem Waschpuffer, der ein nicht ionisches Detergens enthält, z.B. Washing Buffer TRIS, Best.-Nr. 145 500 oder Washing Buffer PBS, Best.-Nr. 140 500

ODER

b) Direkte Zugabe des Detektions-Antikörpers zu SmartBlock™ und Fortsetzung der Inkubation zur Detektion der geblotteten Substanzen.

Sofern es trotz Verwendung von SmartBlock™ zu Hintergrund durch unspezifische Bindungen kommt, empfehlen wir den Einsatz von The Blocking Solution (Best.-Nr. 110 050, 110 125 und 110 500). The Blocking Solution wird durch chemische Modifikation und Spaltung von hochreinem Casein gewonnen. Sie hat dadurch eine vielfach höhere Blockierungseffizienz als Standard-Blockierer und bietet damit maximale Sicherheit in der Anwendung. The Blocking Solution ist universell für alle Assaymethoden einsetzbar.
Die Eignung ist mit den verwendeten Antikörpern in jedem Assay individuell zu testen.

Hintergrund und unspezifische Bindung kann nicht nur an Oberflächen auftreten, sondern auch zwischen Antikörpern und Bestandteilen der zu vermessenden Proben. In diesen Fällen kann nur durch einen Assay-Puffer, der während der immunologischen Nachweisreaktion der Antikörper eingesetzt wird, ein zufriedenstellendes Ergebnis erzielt werden. Hierfür empfehlen wir LowCross-Buffer® (Best.-Nr. 100 050, 100 125 und 100 500), um optimale Ergebnisse zu erzielen. LowCross-Buffer® wirkt wie ein Bindungsfilter, der hochaffine Bindungen der Antikörper unbeeinflusst zulässt und unspezifische Bindungen vermindert, die eine mittlere bis niedrige Bindungsaffinität zeigen. Dadurch lassen sich Interferenzen vermindern, wie z.B. Matrixeffekte, Kreuzreaktivitäten und unspezifische Bindungen an gelöste Bestandteile der Proben.

ProClin ist ein eingetragenes Warenzeichen der Firma Rohm und Haas.
LowCross-Buffer ist ein eingetragenes Warenzeichen der CANDOR Bioscience GmbH.