LowCross-Buffer®

Produktbeschreibung

pH-Wert: pH 7,2 ± 0,2
Stabilisator: enthält 0,1 % ProClin® 300
Lagerung: Bei –20 °C oder bei 2 – 8 °C
Haltbarkeit: bei –20 °C: 1 Jahr, wiederholtes Einfrieren ist möglich bei 2 – 8 °C: 6 Monate

Nur für in-vitro Forschung

Lieferbare Packungsgrößen:

50   ml Bestellnummer: 100 050
125 ml Bestellnummer: 100 125
500 ml Bestellnummer: 100 500

Gebrauchsanweisung

Der LowCross-Buffer® wurde zur Minimierung von unspezifischen Bindungen, Kreuzreaktivitäten und Matrixeffekten bei Immunoassays entwickelt.
Seine Einsatzgebiete sind neben dem ELISA, EIA oder Western Blot auch Immuno-PCR, Protein Arrays und Multianalyt-Immunoassays.

Der Puffer sollte unmittelbar vor Gebrauch nochmals durch Schwenken gründlich durchmischt werden. Der LowCross-Buffer® wird an Stelle des üblichen Probenpuffers eingesetzt.

LowCross-Buffer® ersetzt nicht Blockierungslösungen zur Absättigung von Oberflächen.
Hierzu empfehlen wir The Blocking Solution (Bst-Nr. 110 050, 110 125 und 110 500). LowCross-Buffer® ist nicht einsetzbar als Probenpuffer in Elektrophoresen.
 
LowCross-Buffer® dient als Antikörper- und Proben-Verdünnungspuffer für die immunologische Nachweisreaktion.

Anwendungsbeispiele:

ELISA: Verdünnungspuffer der Probe und der Detektorantikörper
Western Blot: Verdünnungspuffer der Primär- und Sekundärantikörper
Immunhistochemie: Verdünnungspuffer der Primär und Sekundärantikörper
Proteinarrays: Verdünnungspuffer der Proben und der Detektorantikörper

Verdünnung der Probe:
Standards und Proben für ELISA oder Proteinarrays können beliebig, jedoch mindestens 1:2 in LowCross-Buffer® verdünnt werden. Es ist jedoch darauf zu achten, dass die Standards und Proben gleich behandelt werden.

Verdünnung der Antikörper:
Antikörper können beliebig in LowCross-Buffer® verdünnt werden, entsprechend der jeweiligen Empfehlung im Datenblatt der Antikörper. Dies gilt sowohl für die Primär- als auch für die Sekundärantikörper.

Auftreten von Signalreduktion:
In einigen Fällen kann es zur leichten Reduktion des gewünschten Signals kommen, weil LowCross-Buffer® nieder- und mittelaffine Bindungen reduziert. Sofern nieder- bis mittelaffine Antikörper oder polyklonale Antikörper (die in der Regel auch nieder- und mittelaffin bindende Anteile enthalten) verwendet werden, kann daher eine leichte Reduktion des Signals auftreten.

Im Falle von polyklonalen Antikörpern lässt sich durch moderate Erhöhung der Antikörper-konzentration auch die Anzahl hochaffiner Antikörper erhöhen, um die gewünschte Signalstärke wieder zu erreichen. Dabei bleiben die nieder- und mittelaffinen Bindungen durch LowCross-Buffer® unterdrückt.

Im Falle von nieder- bis mittelaffinen Antikörpern (auch monoklonalen) kann eine Vorverdünnung des LowCross-Buffer® mit entsalztem Wasser vor Verwendung als Antikörper-Verdünnungspuffer sinnvoll sein, falls bei unverdünnter Verwendung auch das gewünschte Signal reduziert wird. In diesem Fall können aber auch Kreuzreaktivitäten durch unerwünschte mittelaffine Bindungen geringfügig wieder ermöglicht werden.

Ungeachtet der Verwendung von LowCross-Buffer® ist es zur Vermeidung der unspezifischen Bindung an Oberflächen wie ELISA-wells oder Membranen notwendig, diese Oberflächen durch eine Blockierungslösung abzusättigen. Hierzu empfehlen wir The Blocking Solution (Bst-Nr. 110 050, 110 125 und 110 500).

Bei besonders störanfälligen und empfindlichen Assays – beispielsweise Immuno-PCR – kann der LowCross-Buffer® zusätzlich auch als Waschpuffer eingesetzt werden.

Bei Fluoreszenz-Immunoassays kommt es mitunter zu Quench-Effekten von Fluorescein-Farbstoffen durch Bestandteile der Immunoassays – oder möglicherweise auch durch Puffer-Bestandteile. Daher empfehlen wir die Verwendung von Oyster*- (Denovo Biolabels), CyDye**- (Amersham) oder Alexa***-Fluoreszenzfarbstoffen (Molecular Probes).

*Oyster Dye ist eingetragenes Warenzeichen der Firma Denovo Biolabels
**CyDye ist eingetragenes Warenzeichen der Firma Amersham Bioscience
***Alexa Fluor Dye ist eingetragenes Warenzeichen der Firma Molecular Probes

LowCross-Buffer ist ein eingetragenes Warenzeichen der Firma CANDOR Bioscience
ProClin ist ein eingetragenes Warenzeichen der Firma Rohm und Haas