FAQ

Frage

Bei meinem Sandwich-ELISA, der mit einem Peroxidase-gelabelten Sekundärantikörper detektiert wird, erhalte ich einen sehr starken Background. Woran liegt das und kann hier LowCross Buffer® helfen?

Antwort

Hierbei ist es wichtig zu wissen, ob der Sekundärantikörper präadsorbiert wurde, d.h. gereinigt wurde gegen Antikörper anderer Säugetierspezies.
Beispielsweise kann ein Sekundärantikörper gegen „Rabbit-IgG“ auch hochaffin mit „Maus-IgG“ oder „Goat-IgG“ kreuzreagieren, es sei denn, er wurde gegen Antikörper dieser Spezies gereinigt. Ursache ist die hohe Sequenzhomologie der Antikörper der Säugetiere.
Doch oftmals sind die Sekundärantikörper nicht gereinigt (präadsobiert) und kreuzreagieren mit einer hohen Affinität. Dann kann auch LowCross Buffer® nicht helfen.
In solchen Fällen muss der Sekundärantikörper gegen einen anderen präadsorbierten Sekundärantikörper ausgetauscht werden, der auf jeden Fall nicht mit dem Fängerantikörper kreuzreagiert.
Die Firma Biotrend (Köln) hat beispielsweise sehr viele präadsorbierte Antikörper im Programm, mit denen sich diese Kreuzreaktivitäten vermeiden lassen.